快速銀染試劑盒 BL620A 現(xiàn)貨

快速銀染試劑盒 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 BL620A 快速銀染試劑盒 25 T 產(chǎn)品簡介： 快速銀染試劑盒(Fast Silver Stain Kit)是一種快速簡單、可用于 SDS-PAGE 或非變性 PAGE 等蛋白銀染的試劑盒。本試劑盒也可以用于 2D 凝膠的銀染，并且染色后兼容后續(xù)的質(zhì) 譜檢測。本試劑盒只需約 90 分鐘內(nèi)可以完成凝膠的銀染。對于 BSA 蛋白，檢測靈敏度可以 達到 0.3ng 蛋白。 本試劑盒可足夠用于 25 塊常規(guī)的 8×10cm 凝膠的銀染。 說明書后附有實驗記錄表格，方便記錄實驗步驟。 產(chǎn)品組份： 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 貯存 RTD6401-1 銀染增敏液(100×) 26 ml 常溫 RTD6401-2 銀溶液(100×) 26 ml 常溫，避光 RTD6401-3 銀染基本顯色液(10×) 250 ml 常溫 RTD6401-4 銀染顯色加速液(2000×) 1.5 ml 常溫，避光 RTD6401-5 銀染終止液(20×) 125 ml 常溫 注意事項： 1、由于銀染非常靈敏，操作時請注意盡量使用高純度的水，并確保所使用的器皿非常 清潔，使用潔凈的玻璃器皿。操作時必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。 2、需自備乙醇、冰醋酸及 MilliQ 級純水或雙蒸水。 3、下述使用說明中各種溶液的使用量適用于大小為 8×10cm 厚度為 0.75-1mm 的凝膠。 對于更大的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放大，對于更厚的凝膠，作用時間 需按照厚度的比例適當(dāng)延長。 4、本說明書所指的常溫溫為 20-25℃，操作溫度較低時由于溶液的擴散能力下降，各 步驟需適當(dāng)延長時間。 5、銀染基本顯色液(10×)在低溫環(huán)境下可能會出現(xiàn)沉淀，可在 30-37℃水浴中溶解， 并充分混勻后使用。 使用方法： 一、固定步驟： 1、電泳結(jié)束后，取凝膠放入約 100ml 固定液中，在搖床上室溫搖動 20 分鐘，搖動速度 為 60-70rpm。固定 40 分鐘以上甚至整夜可以進一步降低背景。 固定液的配制： 固定液配制量 無水乙醇 冰醋酸 超純水 100 ml 50 ml 10 ml 40 ml 2、 30%乙醇洗滌： 棄固定液，加入 100ml 30%乙醇，在搖床上室溫搖動 10 分鐘，搖動速度為 60-70rpm。 30%乙醇的配制： 70ml MilliQ 級純水或雙蒸水中加入 30ml 乙醇，混勻后即成 100ml 30%乙醇。

3、水漂洗： 棄 30%乙醇，加入 200ml MilliQ 級純水或雙蒸水，在搖床上室溫搖動 10 分鐘，搖動速 度為 60-70rpm。 二、增敏步驟： 1、棄水，加入 100ml 銀染增敏液(1×)，在搖床上室溫搖動 2 分鐘，搖動速度為 60-70rpm。 銀染增敏液(1×)的配制： 99 ml MilliQ 級純水或雙蒸水中加入 1ml 銀染增敏液(100×)，混勻后即為銀染增敏液 (1X)。銀染增敏液(1×)配制后需在 2 小時內(nèi)使用。 2、水漂洗(共 2 次)： 棄原有溶液，加入 200ml MilliQ 級純水或雙蒸水，在搖床上室溫搖動 1 分鐘，搖動速 度為 60-70rpm。 重復(fù)此步驟一次。 三、銀染步驟： 1. 棄水，加入 100ml 銀溶液(1×)，在搖床上室溫搖動 10 分鐘，搖動速度為 60-70rpm。 銀溶液(1X)的配制： 99ml MilliQ 級純水或雙蒸水中加入 1ml 銀溶液(100X)，混勻后即為銀溶液(1X)。銀溶 液(1X)配制后需在 2 小時內(nèi)使用。 2、水洗滌： 棄原有溶液，加入 100ml MilliQ 級純水或雙蒸水，在搖床上室溫搖動 1-1.5 分鐘，搖 動速度為 60-70rpm。 注意：水洗滌的時間不能超過 1.5 分鐘。 四、顯色步驟： 棄水，加入 100ml 銀染顯色液，在搖床上室溫搖動 3-7 分鐘，直至出現(xiàn)比較理想的預(yù)期 蛋白條帶，搖動速度為 60-70rpm。 銀染顯色液的配制： 銀染顯色液配制量 銀染基本顯色液(10×) 超純水 銀染顯色加速液(2000X) 100 ml 10 ml 90 ml 0.05 ml 注：銀染顯色加速液(2000X)有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥內(nèi)操作；銀染顯色液配制后 需在 20 分鐘內(nèi)使用。 五、終止步驟： 1、棄銀染顯色液，加入 100ml 銀染終止液(1×)，在搖床上室溫搖動 10 分鐘，搖動速 度為 60-70rpm。終止時有氣體產(chǎn)生屬正?，F(xiàn)象，產(chǎn)生的氣體為二氧化碳。 銀染終止液(1×)的配制： 95ml MilliQ 級純水或雙蒸水中加入 5ml 銀染終止液(20×),混勻后即為銀染終止液 (1X)。銀染終止液(1X)配制后宜當(dāng)天使用。 2、水洗滌： 棄銀染終止液，加入 100ml MilliQ 級純水或雙蒸水，在搖床上室溫搖動 5 分鐘，搖動 速度為 60-70rpm。 六、保存： 可在 MilliQ 級純水或雙蒸水中保存?；虿捎眠m當(dāng)?shù)姆绞街苽涑筛赡z。 常見問題： 1、 背景太深： （1）顯色時間過長。通常顯色反應(yīng)會在 10 分鐘內(nèi)結(jié)束，顯色反應(yīng)時間過長會導(dǎo)致背

景很深。 （2）洗滌不充分。洗滌時間過短，或洗滌液加入的量不足，或者容器過于狹小導(dǎo)致?lián)u 動時溶液不易充分混合，或搖動速度過慢，導(dǎo)致混勻不充分。請按照說明書的建議確保各種 溶液的用量和作用時間，搖床的推薦速度為 60-70rpm。 （3）凝膠中原有的緩沖液等未在固定步驟中去除干凈。一方面需確保固定的時間和固 定液的用量，另一方面對于不是zui常用的 Bis-Tris 緩沖的凝膠需要更長的固定時間以充分 去除凝膠中的原有緩沖成分，以降低背景。 （4）水的純度太低。需使用大于 16 MΩ·cm 的高純度水。 2、 蛋白條帶非常淺： （1）蛋白的半胱氨酸(Cysteine)殘基的含量特別低或幾乎沒有。半胱氨酸殘基的存在 對于銀染非常重要，半胱氨酸殘基的含量過低會導(dǎo)致檢測靈敏度下降。 （2）銀染后水洗滌時間過長。在銀溶液染色時需嚴格控制水洗滌的時間，水洗滌的時 間不能超過 1.5 分鐘，否則會導(dǎo)致過多的銀離子被洗去，導(dǎo)致檢測靈敏度下降。 （3）樣量不足。本試劑盒檢測 BSA 的靈敏度可以達到 0.3ng，對于不同的蛋白檢測靈 敏度可能不同。對于一些蛋白可能需要大于 1ng 的蛋白量才能被檢測到。 （4）固定步驟后的洗滌不夠充分。導(dǎo)致少量乙酸殘留，影響后續(xù)檢測。確保 30%乙醇 洗滌和水洗滌的用量和時間，可以適當(dāng)延長洗滌時間。 3、凝膠上出現(xiàn)小點或或其它非蛋白的痕跡： （1）凝膠沒有充分被溶液浸沒。請注意選擇大小合適的容器，并加入足量的各種溶液， 同時需保持適當(dāng)?shù)幕靹蛩俣却_保凝膠可以被溶液浸沒。 （2）用于銀染的容器沒有充分洗滌干凈。容器需先用洗滌劑充分洗滌，隨后用自來水 充分沖洗，zui后用高純度水再洗滌數(shù)次。該容器能于銀染，并注意避免各種可能的 蛋白污染。為確保充分洗滌干凈，對于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗滌劑及 自來水洗滌后用 50%硝酸洗滌，隨后用高純度水充分洗滌。 （3）指紋或其它壓痕。請注意戴手套操作，切勿直接接觸皮膚。操作時請注意盡量勿 擠壓、折疊或摩擦凝膠。 （4）有金屬物質(zhì)接觸凝膠。金屬物質(zhì)例如金屬鑷子等接觸凝膠會出現(xiàn)非特異性痕跡。 4、在 60-70 kD 處出現(xiàn)一片模糊的蛋白染色背景： 皮膚上脫落的角蛋白(keratin)污染了蛋白樣品。一方面需注意戴手套操作，另一方面 需注意盛放蛋白樣品的容器蓋子盡量不要敞開，甚至在取放蛋白樣品時在超凈臺內(nèi)進行以避 免可能的角蛋白污染。 5、在凝膠的頂端處出現(xiàn)黃色背景： （1）樣品中 DTT 濃度很高。采用其它適當(dāng)?shù)倪€原試劑，或者在許可范圍內(nèi)適當(dāng)減少 DTT 的用量。 （2）采用 Tris-Glycine-SDS 電泳體系。Tris-Glycine-SDS 電泳體系中的 Glycine 會 導(dǎo)致背景凝膠的頂端出現(xiàn)輕微的黃色背景。 6、銀在染色器皿中出現(xiàn)沉淀： 染色器皿中可能含有殘余的洗滌劑或上次銀染時的殘余試劑。需確保把染色器皿洗滌干 凈。 保存條件： 常溫保存，開封后一年有效。

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