總RNA提取試劑

原理簡(jiǎn)介
本試劑以本公司所產(chǎn)總RNA提取試劑（TRIzol）為基礎(chǔ)，結(jié)合玻璃奶核酸吸附技術(shù)，使zui終提取的RNA試劑純度更高。

注意事項(xiàng)
1． 經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。
2． 使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3． 所有離心步驟用低溫離心機(jī)在4℃條件下離心，如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有低溫離心機(jī)，也可以使用常溫離心機(jī)，但所提得的RNA可能會(huì)降解嚴(yán)重些。
 

操作步驟
準(zhǔn)備工作：使用前請(qǐng)先開啟一瓶新的無(wú)水乙醇，倒入漂洗液中，倒?jié)M至離瓶口約0.5-1ml，蓋上瓶口，搖勻。
1．樣品處理：
a，植物組織：以葉片RNA提取為例。取新鮮葉片在液氮中充分研磨，隨后把研磨后的粉末迅速加入到裂解液中。大約50-100mg葉片使用1ml 裂解液。
b，動(dòng)物組織：以鼠肝臟RNA提取為例。取新鮮或-70℃凍存組織，大約10-30mg組織加1ml裂解液，用一次性組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
a，單層培養(yǎng)細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，每10cm2面積加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。
c，細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每5-10×106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液。
d，血液處理：直接取新鮮的血液，加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫放置2分鐘，8,000-10,000rpm 離心1分鐘。*吸棄上清，收集白細(xì)胞沉淀。每200 ul血液收集的白細(xì)胞沉淀加入1 ml裂解液。
2．混勻，將勻漿樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．向勻漿樣品中加0.2ml氯f(wàn)ang，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘，使其自然分相。如不能旋渦混勻，可手動(dòng)顛倒混勻2分鐘代替。
4．2-8℃ 12,000 rpm離心10分鐘。樣品會(huì)分成兩層，RNA主要在上層的水相中，把水相（通常為500μl）轉(zhuǎn)移到新DEPC處理管中。如果上清還有沉淀，可再次離心。
5．玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶，混勻，室溫放置2分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入800ul漂洗液，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，再用600ul漂洗液洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清。
7．室溫放置10分鐘，加入50－100ul洗脫緩沖液混勻溶解，靜置5分鐘。離心，取上清為所提RNA。
8．電泳或者其他方法檢測(cè)，進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。